Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
IDE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421021
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IDE Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IDE, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IDE Antibody (F-9): sc-393887
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IDE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421021 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
L’enzima degradante l’insulina (IDE) è una metalloproteasi zinco-dipendente che media la proteolisi intracellulare ed extracellulare dell’insulina e di altri piccoli peptidi, contribuendo al turnover peptidico e alla regolazione della durata della segnalazione. Nei tessuti murini, l’attività di IDE si integra con la segnalazione insulinica/IGF, il traffico endosomiale e le vie della proteostasi che modellano l’omeostasi metabolica e le risposte allo stress. Alterazioni dell’espressione o della funzione di IDE sono state associate a una disregolazione della gestione del glucosio e della clearance dei peptidi, e IDE è frequentemente studiato in modelli pertinenti ai fenotipi metabolici e all’accumulo di peptidi associato alla neurodegenerazione. Di conseguenza, Ide rappresenta un utile nodo genetico per analizzare come la degradazione dei peptidi influenzi le reti di segnalazione cellulari e la biologia di proteine inclini all’aggregazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IDE (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ide in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ide insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ide a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IDE.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ide per lo studio della segnalazione di IDE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ide critici per la funzione di IDE
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ide per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IDE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IDE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ide. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IDE Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IDE (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ide per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ide definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.