Id1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400341-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Id1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Id1 Double Nickase Plasmid (h) e il Id1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ID1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Id1 Antibody (B-8): sc-133104
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Id1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400341-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Id1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400341-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano ID1 codifica Id1, una proteina helix–loop–helix (HLH) priva della regione basica di legame al DNA e che agisce come regolatore dominante-negativo dei fattori di trascrizione bHLH. Sequestrando le E-proteine, Id1 modula programmi trascrizionali che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’impegno di linea e la differenziazione, ed è frequentemente associata a stati di tipo staminale e alla plasticità cellulare. L’espressione di ID1 è regolata a valle di segnali mitogenici e di sviluppo, inclusa la segnalazione associata a BMP/TGF-β, e si integra con vie che influenzano proliferazione e migrazione. Un’attività deregolata di ID1 è stata associata a reti trascrizionali oncogeniche e a un’alterata differenziazione in molteplici contesti patologici, supportandone l’impiego come bersaglio per studi meccanicistici sul controllo della crescita e sulle decisioni di destino cellulare.
Id1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ID1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ID1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ID1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ID1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.