ICAM-1/CD54 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400098-LAC

La molecola di adesione intercellulare 1 (ICAM1), nota anche come ICAM-1/CD54, è una glicoproteina di superficie cellulare appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline che media l’adesione stabile dei leucociti e la loro transmigrazione legandosi a integrine quali LFA-1 (ITGAL/ITGB2) e Mac-1 (ITGAM/ITGB2). La sua espressione è fortemente indotta da citochine infiammatorie e dalla segnalazione dei recettori di riconoscimento dei patogeni, integrando input delle vie NF-κB e MAPK per regolare l’attivazione endoteliale e il traffico delle cellule immunitarie. ICAM-1 partecipa inoltre al rimodellamento del citoscheletro e alla segnalazione “outside-in”, che può influenzare la funzione di barriera e le interazioni cellula–cellula. Un’espressione deregolata di ICAM1 è associata a infiammazione cronica, patologie vascolari, fenotipi autoimmuni e dinamiche del microambiente immunitario associato ai tumori, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici dell’infiammazione e della biologia dell’adesione.

Le particelle di attivazione lentivirale ICAM-1/CD54 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ICAM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ICAM-1/CD54 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ICAM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ICAM-1/CD54. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ICAM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.