ICAM-1/CD54 Plasmide Double Nickase (m): sc-421013-NIC

Il gene murino *Icam1* codifica la molecola di adesione intercellulare 1 (ICAM-1/CD54), un recettore inducibile della superfamiglia delle immunoglobuline espresso sulle cellule endoteliali, sui leucociti e su numerose linee stromali ed epiteliali durante l’infiammazione. ICAM-1 si lega a integrine quali LFA-1 (ITGAL/ITGB2) e Mac-1 (ITGAM/ITGB2) per sostenere l’adesione stabile, la transmigrazione e la stabilizzazione della sinapsi immunitaria, collegando programmi guidati dalle citochine alla segnalazione da contatto cellula–cellula. La sua espressione è regolata da vie infiammatorie tra cui NF-κB e JAK/STAT in risposta a stimoli come TNF-α e IL-1, coordinando il reclutamento leucocitario e l’attivazione vascolare. La biologia di ICAM-1 alterata o deregolata è comunemente studiata in modelli di autoimmunità, infezione, infiammazione cronica e interazioni tumore–sistema immunitario, in cui adesione e traffico cellulare modellano la patologia tissutale.

ICAM-1/CD54 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Icam1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Icam1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Icam1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Icam1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.