ICAM-1/CD54 Plasmide Double Nickase (h): sc-400098-NIC

ICAM1 codifica per la molecola di adesione intercellulare 1 (ICAM-1/CD54), un recettore inducibile della superfamiglia delle immunoglobuline espresso sulle cellule endoteliali e su molteplici sottopopolazioni di leucociti, che favorisce l’adesione stabile e la transmigrazione delle cellule immunitarie. ICAM-1 lega integrine come LFA-1 (ITGAL/ITGB2) e MAC-1 (ITGAM/ITGB2), collegando i programmi di attivazione guidati dalle citochine all’arresto dei leucociti, alla diapedesi e alla stabilità della sinapsi immunologica. La sua espressione è fortemente regolata dalla segnalazione infiammatoria, incluse le vie NF-κB e MAPK a valle di TNF-α, IL-1 e dei recettori di riconoscimento dei pattern, e contribuisce all’attivazione endoteliale e all’infiltrazione immunitaria nei tessuti. Una disregolazione di ICAM1 è associata a stati infiammatori cronici, infiammazione vascolare e interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendolo un marcatore molto utilizzato e un nodo meccanicistico per studiare il traffico leucocitario e i microambienti infiammatori.

ICAM-1/CD54 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ICAM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ICAM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ICAM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ICAM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.