Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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I2PP2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400881
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- I2PP2A Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico I2PP2A, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: I2PP2A Antibody (F-9): sc-133138
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
I2PP2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400881 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SET (noto anche come I2PP2A) codifica una proteina multifunzionale nucleare e citoplasmatica che inibisce la protein fosfatasi 2A (PP2A), influenzando così il controllo della progressione del ciclo cellulare, dell’apoptosi e dei programmi trascrizionali dipendenti dalla fosforilazione. I2PP2A partecipa alla regolazione della cromatina tramite interazioni con istoni e complessi associati alla cromatina, collegando SET alle risposte al danno al DNA, allo stress replicativo e alla modulazione epigenetica dell’espressione genica. Limitando l’attività di PP2A, SET può influenzare assi di segnalazione chiave come MAPK/ERK e PI3K/AKT, che dipendono da un turnover della fosforilazione bilanciato. Un’espressione o un’attività disregolata di SET è stata associata a stati di segnalazione oncogenici e a processi neuroinfiammatori o neurodegenerativi, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione delle fosfatasi e sulle vie associate alla cromatina.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO I2PP2A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SET in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SET insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SET a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina I2PP2A.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SET per lo studio della segnalazione di I2PP2A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SET critici per la funzione di I2PP2A
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SET per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal I2PP2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal I2PP2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SET. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal I2PP2A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR I2PP2A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SET per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SET definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.