HYPE Plasmide Double Nickase (h): sc-406626-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HYPE Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HYPE Double Nickase Plasmid (h) e il HYPE Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FICD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HYPE Antibody (G-7): sc-515368
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HYPE Plasmide Double Nickase (h) | sc-406626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HYPE Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FICD codifica HYPE, un enzima con dominio Fic associato al reticolo endoplasmatico che catalizza l’AMPilazione e la de-AMPilazione delle proteine bersaglio, in particolare dello chaperone HSPA5/GRP78. Modulando l’attività di GRP78, HYPE influenza la proteostasi, la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e l’adattamento allo stress del RE, integrandosi con le vie che coordinano il ripiegamento proteico e il controllo qualità. Un’omeostasi del RE e una segnalazione di stress deregolate, collegate all’attività di FICD/HYPE, sono state associate a una maggiore vulnerabilità cellulare in contesti quali neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e biologia del cancro, rendendolo un target rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione sensibili allo stress.
HYPE Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FICD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FICD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FICD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FICD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.