HXK II Plasmide Double Nickase (h): sc-400611-NIC

Il gene umano **HK2** codifica l'esochinasi II (**HXK II**), un enzima associato ai mitocondri che catalizza la fosforilazione del glucosio a glucosio-6-fosfato dipendente da ATP, impegnando il glucosio nella glicolisi e nella via del pentoso fosfato. Accoppiandosi ai canali anionici voltaggio-dipendenti (VDAC) sulla membrana mitocondriale esterna, HXK II contribuisce a coordinare la bioenergetica cellulare, l'omeostasi redox e i flussi metabolici in condizioni variabili di nutrienti e ossigeno. HK2 è spesso studiato nel contesto della riprogrammazione metabolica, in cui un controllo glicolitico alterato influenza proliferazione, risposte allo stress e adattamento all'ipossia. Un'attività e un'espressione deregolate di HK2/HXK II sono state implicate in molteplici modelli rilevanti per la malattia, tra cui il metabolismo tumorale e stati di insulino-resistenza, rendendolo un bersaglio comune per studi meccanicistici sulla gestione del glucosio.

HXK II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HK2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.