Hus1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403287-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hus1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Hus1 Double Nickase Plasmid (h) e il Hus1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HUS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hus1 Antibody (G-3): sc-166440
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hus1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403287-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hus1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403287-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HUS1 codifica Hus1, un componente fondamentale della pinza scorrevole RAD9A–RAD1–HUS1 (9-1-1), che viene caricata sul DNA danneggiato per coordinare la risposta al danno al DNA dipendente da ATR. Attraverso interazioni con fattori di checkpoint e di riparazione, Hus1 contribuisce a promuovere la stabilità della forcella di replicazione, la segnalazione del checkpoint in fase S e la risoluzione di lesioni diverse, incluse quelle derivanti da stress replicativo. L’alterazione di questa via può aumentare l’instabilità genomica e modificare la progressione del ciclo cellulare, rendendo la funzione di HUS1 rilevante per studi sui processi mutazionali e sulla competenza di riparazione del DNA nelle cellule umane. HUS1 è quindi ampiamente utilizzato come punto d’ingresso meccanicistico per interrogare il controllo dei checkpoint, il mantenimento del genoma e le reti di risposta allo stress.
Hus1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HUS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HUS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HUS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HUS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.