Plasmide Double Nickase (h) HuR/ELAV1: sc-400141-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HuR/ELAV1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HuR/ELAV1 Double Nickase (h) et le plasmide HuR/ELAV1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ELAVL1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HuR/ELAV1 | sc-400141-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HuR/ELAV1 | sc-400141-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELAVL1 (HuR/ELAV1) code une protéine liant l’ARN qui reconnaît des éléments riches en AU et qui régule l’expression génique post‑transcriptionnelle en contrôlant la stabilité des ARNm, l’épissage, l’export nucléaire et la traduction. HuR navette entre le noyau et le cytoplasme et sa fonction est modulée par des voies de signalisation sensibles au stress et par phosphorylation, ce qui façonne des programmes géniques impliqués dans la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, l’inflammation et la différenciation. En stabilisant des transcrits codant des cytokines, des facteurs de croissance et des régulateurs de survie, HuR intègre des régulons d’ARN qui influencent l’adaptation cellulaire aux signaux du microenvironnement. Une activité d’ELAVL1 dérégulée et une localisation altérée de HuR ont été associées à la signalisation oncogénique, à des états inflammatoires chroniques et à des voies pertinentes pour les maladies neurodégénératives et cardiovasculaires, ce qui en fait une cible largement utilisée comme nœud mécanistique en biologie de l’ARN.
HuR/ELAV1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELAVL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELAVL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELAVL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELAVL1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.