Plásmido CRISPR de Activación (h) HuR/ELAV1: sc-400141-ACT

ELAVL1 (HuR) es una proteína de unión a ARN expresada de forma ubicua que reconoce elementos ricos en AU en las regiones 3′ UTR para estabilizar los ARNm diana y modular la traducción. Al coordinar la regulación génica postranscripcional, HuR influye en la progresión del ciclo celular, la dinámica de los gránulos de estrés, las respuestas al daño del ADN y la señalización inflamatoria, incluidos programas vinculados a NF-κB y MAPK. El transporte (shuttling) de HuR entre el núcleo y el citoplasma integra señales del estrés oxidativo y de la señalización por citocinas para remodelar la salida del transcriptoma. La actividad desregulada de ELAVL1 se ha asociado con un control alterado de la apoptosis, la senescencia y redes de expresión génica prooncogénicas en múltiples contextos celulares relevantes para enfermedades.

HuR/ELAV1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ELAVL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HuR/ELAV1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ELAVL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ELAVL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HuR/ELAV1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ELAVL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HuR/ELAV1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HuR/ELAV1 en células tumorales con expresión de ELAVL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.