Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Huntingtin Plasmide Double Nickase (h): sc-401441-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Huntingtin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Huntingtin Double Nickase Plasmid (h) e il Huntingtin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HTT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Huntingtin Antibody (3E10): sc-47757
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Huntingtin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401441-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Huntingtin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401441-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HTT codifica l’huntingtina, una grande proteina citosolica e nucleare che sostiene l’omeostasi neuronale grazie al suo ruolo nel traffico vescicolare, nella dinamica endosomiale, nella regolazione trascrizionale e nelle vie autofagia–lisosoma. L’huntingtina interagisce con i macchinari di trasporto basati sui microtubuli e con reti di segnalazione che influenzano la funzione sinaptica, l’integrità mitocondriale e le risposte allo stress. L’espansione di poliglutamine all’interno dell’huntingtina altera la proteostasi e il trasporto cellulare, determinando una vulnerabilità selettiva dei neuroni striatali e corticali. Questi meccanismi legati a HTT sono ampiamente utilizzati per modellare perturbazioni di vie associate alla neurodegenerazione, tra cui autofagia alterata, traffico assonale compromesso e disregolazione trascrizionale.
Huntingtin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.