HuC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400172

Panoramica

ELAVL3 (HuC) è una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni della famiglia Hu/ELAV, che riconosce elementi ricchi in AU e regola la stabilità, lo splicing, la localizzazione e la traduzione degli mRNA nei neuroni in sviluppo e maturi. Controllando programmi post-trascrizionali legati alla differenziazione neuronale, alla funzione sinaptica e alla crescita dei neuriti, ELAVL3 contribuisce a modellare l’espressione genica dipendente dall’attività e l’omeostasi neuronale. Un’alterata regolazione delle reti di RNA della famiglia ELAV è stata associata a processi di neurosviluppo e neurodegenerazione, e ELAVL3 è frequentemente utilizzato come marcatore e come punto d’ingresso meccanicistico per lo studio dell’identità neuronale. La mappatura dei regoloni di RNA dipendenti da ELAVL3 supporta la ricerca sulle vie del metabolismo dell’RNA che influenzano l’eccitabilità, la plasticità sinaptica e le risposte allo stress in modelli neuronali umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HuC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELAVL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELAVL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELAVL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HuC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELAVL3 per lo studio della segnalazione di HuC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELAVL3 critici per la funzione di HuC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELAVL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HuC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HuC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELAVL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HuC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HuC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELAVL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELAVL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.