HuB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400169

Panoramica

ELAVL2 (HuB) è una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni della famiglia ELAV/Hu che riconosce elementi ricchi in AU per regolare la maturazione del pre‑mRNA, la stabilità dell’mRNA, la sua localizzazione e la traduzione. Modellando programmi di espressione genica post-trascrizionali, HuB contribuisce alla differenziazione neuronale, allo sviluppo sinaptico e alla plasticità dipendente dall’attività attraverso il controllo di trascritti coinvolti nella neurogenesi e nella dinamica del citoscheletro. I reguloni di RNA associati a ELAVL2 intersecano vie che governano la specificazione del destino cellulare e le risposte allo stress, e pattern di espressione alterati sono stati riportati in contesti di malattie del neurosviluppo e neurodegenerative, nonché in alcune neoplasie del sistema nervoso. Queste caratteristiche rendono ELAVL2 un nodo utile per analizzare come il metabolismo dell’RNA influenzi l’identità neuronale e la disfunzione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HuB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELAVL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELAVL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELAVL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HuB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELAVL2 per lo studio della segnalazione di HuB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELAVL2 critici per la funzione di HuB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELAVL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HuB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HuB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELAVL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HuB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HuB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELAVL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELAVL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.