HSPA8/HSC70 Plasmide Double Nickase (h): sc-418508-NIC

HSPA8 codifica lo chaperone HSC70, espresso in modo costitutivo, un componente centrale della famiglia HSP70 che si lega a polipeptidi nascenti o denaturati da stress per favorirne il ripiegamento, il ripiegamento corretto e la prevenzione dell’aggregazione. HSC70 partecipa a cicli chaperonici ATP-dipendenti insieme a co-chaperoni come le proteine DNAJ e i fattori di scambio nucleotidico, sostenendo la proteostasi nel citosol e negli organelli. È inoltre un regolatore chiave dell’autofagia mediata da chaperoni, della rimozione del rivestimento di clatrina durante l’endocitosi e di vie di controllo qualità proteico, incluso il turnover tramite ubiquitina–proteasoma. La disregolazione della proteostasi e del traffico legati a HSPA8/HSC70 è stata implicata nella neurodegenerazione, nella tolleranza allo stress delle cellule tumorali e nella biologia delle malattie infettive, rendendolo un nodo ampiamente studiato nelle reti di omeostasi cellulare.

HSPA8/HSC70 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSPA8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSPA8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSPA8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSPA8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.