HSPA5/BiP/GRP78 Plasmide Double Nickase (h): sc-400073-NIC

HSPA5 codifica lo chaperone residente nel RE BiP/GRP78 (HSPA5), un regolatore centrale della proteostasi che si lega ai polipeptidi nascenti, previene l'aggregazione e favorisce il ripiegamento e l'assemblaggio delle proteine secretorie e di membrana. In quanto sensore ed effettore chiave della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR), HSPA5 modula la segnalazione dello stress del RE attraverso le vie PERK–EIF2α, IRE1–XBP1 e ATF6, influenzando traduzione, controllo qualità e programmi trascrizionali adattativi. HSPA5 partecipa anche alla degradazione associata al RE (ERAD) e all'omeostasi del calcio, collegando la capacità di ripiegamento agli stati redox e metabolici. Un'attività deregolata di HSPA5 è associata a patologie caratterizzate da stress proteotossico cronico, tra cui biologia tumorale, neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e stati infiammatori, rendendola un nodo cruciale per studi meccanicistici dell'adattamento allo stress.

HSPA5/BiP/GRP78 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSPA5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSPA5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSPA5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSPA5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.