HSPA14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407280

Panoramica

HSPA14 (proteina simile a Hsp70 1) è un membro della famiglia di chaperoni HSP70 che supporta il controllo di qualità delle proteine stabilizzando i polipeptidi nascenti, favorendo il corretto ripiegamento e limitando l’aggregazione durante lo stress cellulare. Partecipa a reti di proteostasi legate alla traduzione, all’attività chaperonica associata ai ribosomi e a vie di risposta allo stress che coordinano il recupero dallo shock termico e da altri insulti proteotossici. Modulando l’equilibrio tra capacità di ripiegamento e gestione delle proteine mal ripiegate, HSPA14 contribuisce a plasmare l’omeostasi cellulare in contesti quali lo stress ossidativo, il crosstalk di proteostasi tra RE e citosol e la segnalazione adattativa allo stress. L’attività chaperonica deregolata e lo squilibrio della proteostasi sono comunemente studiati in biologia del cancro, neurodegenerazione e modelli di stress infiammatorio, rendendo HSPA14 un bersaglio utile per indagini meccanicistiche sulla resilienza allo stress e sull’omeostasi proteica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HSPA14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HSPA14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HSPA14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HSPA14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HSPA14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HSPA14 per lo studio della segnalazione di HSPA14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HSPA14 critici per la funzione di HSPA14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HSPA14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HSPA14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HSPA14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HSPA14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HSPA14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HSPA14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HSPA14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HSPA14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.