Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSP 90α Plasmide Double Nickase (h): sc-400088-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HSP 90α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HSP 90α Double Nickase Plasmid (h) e il HSP 90α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSP90AA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HSP 90α Antibody (F-2): sc-515081
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HSP 90α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 90α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSP90AA1 codifica per lo chaperone molecolare HSP90α, un regolatore della proteostasi altamente abbondante e ATP-dipendente che supporta il ripiegamento, la maturazione e la stabilizzazione di numerose proteine "client", tra cui chinasi, recettori nucleari e fattori di trascrizione. HSP90α opera insieme a co-chaperoni nella risposta allo shock termico e si integra in vie che regolano la progressione del ciclo cellulare, la trasduzione del segnale, l'adattamento allo stress e il controllo di qualità delle proteine. Attenuando l'instabilità del proteoma, HSP90α influenza la dinamica dei complessi multiproteici e il turnover dei nodi di segnalazione. La disregolazione dell'attività di HSP90AA1/HSP90α è stata associata a una tolleranza allo stress alterata e al rimodellamento delle reti di segnalazione oncogeniche e infiammatorie, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sulla proteostasi e sulla dipendenza da specifiche vie di segnale.
HSP 90α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSP90AA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSP90AA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSP90AA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSP90AA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.