HSP 105 Plasmide Double Nickase (h): sc-402155-NIC

HSPH1 codifica la proteina da shock termico HSP 105, uno chaperone molecolare ad alto peso molecolare indotto da stress proteotossico, che aiuta a prevenire l’aggregazione delle proteine e favorisce il ripiegamento di quelle mal ripiegate nel citosol. HSP 105 coopera con i sistemi di chaperoni HSP70/HSP40 e contribuisce alle reti di proteostasi collegate alla risposta allo shock termico, alla funzione del sistema ubiquitina–proteasoma e al recupero cellulare dopo stress termico o ossidativo. Stabilizzando le proteine in condizioni di stress, HSPH1 influenza la resistenza all’apoptosi, la progressione del ciclo cellulare e programmi di segnalazione adattativi allo stress. Un’attività chaperonica disregolata e un’elevata espressione di HSPH1 sono state associate a contesti di trasformazione maligna e ad altri stati di squilibrio della proteostasi, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla tolleranza allo stress e sul controllo di qualità proteico.

HSP 105 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSPH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSPH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSPH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSPH1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.