Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
HSL Plasmide Double Nickase (h): sc-401341-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HSL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HSL Double Nickase Plasmid (h) e il HSL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LIPE. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HSL Antibody (G-7): sc-74489
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HSL Plasmide Double Nickase (h) | sc-401341-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401341-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **LIPE** codifica la lipasi ormone-sensibile (HSL), un’idrolasi serinica che catalizza passaggi chiave nella mobilizzazione dei lipidi neutri idrolizzando i diacilgliceroli e altri esteri lipidici negli adipociti e nei tessuti steroidogenici. L’attività di HSL è controllata in modo dinamico dalla fosforilazione mediata da PKA e AMPK e integra la segnalazione adrenergica e insulinica per regolare la lipolisi, il rimodellamento delle goccioline lipidiche e l’equilibrio energetico cellulare. Attraverso il suo ruolo nel flusso degli acidi grassi e negli intermedi di segnalazione lipidica, LIPE influenza l’assetto delle vie metaboliche, inclusi il metabolismo dei glicerolipidi e il successivo utilizzo mitocondriale dei substrati. Alterazioni della funzione di HSL e della regolazione di LIPE sono studiate nel contesto della disfunzione metabolica, dell’infiammazione del tessuto adiposo e di fenotipi associati a insulino-resistenza.
HSL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LIPE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LIPE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LIPE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LIPE interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.