HSF4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403850-NIC

HSF4 (fattore di trascrizione dello shock termico 4) è un fattore di trascrizione che si lega al DNA e coordina la proteostasi regolando le proteine dello shock termico e altri geni responsivi allo stress, con ruoli rilevanti nei programmi di differenziamento cellulare. Nei tessuti oculari, HSF4 contribuisce alla maturazione delle cellule delle fibre del cristallino e al mantenimento dell’omeostasi proteica, processi strettamente legati all’organizzazione del citoscheletro, alle reti di chaperoni e alla protezione dall’aggregazione proteica. Un’attività disregolata di HSF4 è stata associata a opacità ereditarie del cristallino e a fenotipi correlati alla cataratta, riflettendo la sensibilità del cristallino alle perturbazioni del controllo qualità delle proteine. In quanto nodo dei circuiti trascrizionali di risposta allo stress, HSF4 viene studiato per i suoi effetti sulle transizioni di stato cellulare, sulla regolazione trascrizionale in condizioni di stress proteotossico e sui profili di espressione dei chaperoni a valle.

HSF4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSF4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSF4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSF4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSF4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.