HSF2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402400-ACT

L’HSF2 umano (heat shock factor 2) è un fattore di trascrizione specifico per sequenza che coordina i programmi di risposta allo shock termico e di proteostasi regolando l’espressione di chaperoni molecolari e di altri geni sensibili allo stress. Partecipa a vie cellulari che controllano il ripiegamento proteico, la funzione del proteasoma e l’adattamento allo stress dello sviluppo e ambientale, con interazioni dipendenti dal contesto con altri fattori dello shock termico come HSF1. L’attività di HSF2 è stata collegata a processi di differenziamento e di neurosviluppo, e la disregolazione delle reti trascrizionali di risposta allo stress che coinvolgono HSF2 è oggetto di studio in condizioni caratterizzate da stress proteotossico, inclusi la biologia del cancro e modelli di neurodegenerazione.

HSF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HSF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HSF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HSF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HSF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HSF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HSF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HSF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HSF2 nelle cellule tumorali con espressione di HSF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.