HSF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400432-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HSF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HSF1 Double Nickase Plasmid (h) e il HSF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HSF1 Antibody (E-4): sc-17757
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HSF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400432-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400432-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’HSF1 umano (heat shock factor 1) è un regolatore trascrizionale “master” della risposta allo shock termico, che coordina l’espressione inducibile di chaperoni molecolari come HSP70 e HSP90 per mantenere la proteostasi durante lo stress cellulare. In condizioni di stress proteotossico, HSF1 va incontro a trimerizzazione e si accumula nel nucleo, si lega agli heat shock elements (HSE) e attiva programmi che influenzano il ripiegamento proteico, il controllo qualità e il metabolismo adattativo allo stress. L’attività di HSF1 interagisce con vie che regolano apoptosi, autofagia e risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response), plasmando la resilienza cellulare a insulti ossidativi, termici e metabolici. Una segnalazione di HSF1 deregolata è stata implicata in disturbi della proteostasi e in fenotipi di adattamento allo stress osservati in diversi modelli di malattia, supportando studi meccanicistici delle reti trascrizionali sensibili allo stress.
HSF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.