HSF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400432-KO-2

Panoramica

Il fattore 1 dello shock termico (HSF1) è un regolatore trascrizionale maestro che coordina la risposta cellulare allo shock termico inducendo chaperoni e geni della proteostasi, inclusi membri delle famiglie HSP70 e HSP90, per preservare il corretto ripiegamento delle proteine e limitare lo stress proteotossico. Oltre all’adattamento allo stress acuto, HSF1 integra segnali provenienti dalla funzione del proteasoma, dalla traduzione e dallo stato metabolico per influenzare il controllo della qualità proteica, l’organizzazione del citoscheletro e i programmi di sopravvivenza cellulare. L’attività di HSF1 interseca vie quali la stabilizzazione dei “client” dipendente da HSP90, l’autofagia e la dinamica dei granuli di stress, modellando il modo in cui le cellule rispondono a fattori di stress ambientali e intracellulari. Una segnalazione di HSF1 deregolata è stata implicata nella trasformazione maligna e nel mantenimento dei tumori, così come nella neurodegenerazione e in altri disturbi associati al misfolding proteico, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HSF1 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HSF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HSF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HSF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HSF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HSF1 per lo studio della segnalazione di HSF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HSF1 critici per la funzione di HSF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HSF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HSF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HSF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HSF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HSF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HSF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HSF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HSF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.