HS6ST2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407513

Panoramica

HS6ST2 codifica l’enzima eparan solfato 6-O-sulfotransferasi 2, una proteina residente nel Golgi che catalizza la 6-O-solfatazione dei residui di glucosamina durante la biosintesi dei proteoglicani a eparan solfato. Questa modifica determina i pattern di solfatazione dell’eparan solfato che regolano il legame dei ligandi e le funzioni di co-recettore, influenzando vie di segnalazione quali FGF, VEGF, WNT, BMP e segnali mediati dalle chemochine. Modulando le interazioni dei glicosaminoglicani della matrice extracellulare e della superficie cellulare, HS6ST2 contribuisce all’adesione e alla migrazione cellulare e alla definizione dei pattern di sviluppo. Alterazioni della solfatazione dell’eparan solfato sono state associate a una deregolazione della segnalazione dei fattori di crescita e al rimodellamento del microambiente tumorale, a supporto dell’interesse verso HS6ST2 nella biologia del cancro e in altri disturbi legati alla segnalazione dipendente dalla matrice extracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS6ST2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS6ST2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS6ST2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS6ST2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS6ST2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS6ST2 per lo studio della segnalazione di HS6ST2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS6ST2 critici per la funzione di HS6ST2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS6ST2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS6ST2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS6ST2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS6ST2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS6ST2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS6ST2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS6ST2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS6ST2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.