HS3ST6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408948

Panoramica

HS3ST6 codifica la eparan solfato–glucosamina 3-O-sulfotransferasi 6, un enzima localizzato nell’apparato di Golgi che catalizza la 3-O-solfatazione delle catene di eparan solfato, generando rari motivi di solfatazione che modellano le interazioni tra eparan solfato e proteine. Modulando la microstruttura dei proteoglicani a eparan solfato, HS3ST6 influenza il legame dei ligandi e la formazione di gradienti nella matrice extracellulare e nei contesti di segnalazione sulla superficie cellulare, incidendo su processi quali adesione cellulare, migrazione e segnalazione mediata da recettori. Alterazioni dei pattern di solfatazione dell’eparan solfato sono collegate a una deregolazione della segnalazione di fattori di crescita e citochine e sono state associate alla biologia tumorale e a microambienti infiammatori, rendendo HS3ST6 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione dipendente dai glicosaminoglicani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS3ST6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS3ST6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS3ST6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS3ST6 per lo studio della segnalazione di HS3ST6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS3ST6 critici per la funzione di HS3ST6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS3ST6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS3ST6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS3ST6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS3ST6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS3ST6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS3ST6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.