HRF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423518

Panoramica

Mouse Tpt1 codifica il fattore di rilascio dell’istamina (HRF), noto anche come proteina tumorale controllata a livello traslazionale, una proteina citosolica conservata implicata nella regolazione della crescita cellulare, delle risposte allo stress e della segnalazione di sopravvivenza. HRF partecipa a vie collegate all’omeostasi del calcio, al controllo dell’apoptosi e alla modulazione delle funzioni infiammatorie e delle cellule immunitarie, con ruoli riportati nel rilascio di citochine e nei programmi di attivazione cellulare. Un’attività alterata di HRF/TPT1 è stata associata a una disregolazione dell’infiammazione e della segnalazione immunitaria, nonché a fenotipi proliferativi anomali rilevanti per l’oncologia e il rimodellamento tissutale. Queste caratteristiche rendono Tpt1 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di adattamento allo stress, la regolazione immunitaria e le decisioni sul destino cellulare nei sistemi modello murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HRF (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HRF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpt1 per lo studio della segnalazione di HRF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tpt1 critici per la funzione di HRF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HRF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HRF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.