Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HPS-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404822
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HPS-4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HPS-4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HPS-4 Antibody (A-6): sc-398070
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HPS-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404822 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
HPS4 codifica HPS-4, un componente centrale del complesso BLOC-3 (biogenesis of lysosome-related organelles complex-3), coinvolto nella biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi. BLOC-3 agisce come fattore di scambio di nucleotidi guaninici (GEF) che regola il traffico di membrana dipendente da Rab32/Rab38. Attraverso queste vie, HPS-4 supporta lo smistamento e la consegna dei carichi a lisosomi e organelli correlati ai lisosomi, influenzando la maturazione dei melanosomi, la formazione dei granuli densi piastrinici e l’omeostasi endolisosomiale. L’alterazione di HPS4 è associata alla sindrome di Hermansky–Pudlak di tipo 4, un disturbo caratterizzato da difetti nella biogenesi degli organelli e nel trasporto vescicolare. HPS4 è quindi ampiamente utilizzato per studiare la dinamica endosomiale, la maturazione degli organelli e i fenotipi cellulari associati a un traffico lisosomiale compromesso.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HPS-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HPS4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HPS4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HPS4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HPS-4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HPS4 per lo studio della segnalazione di HPS-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni HPS4 critici per la funzione di HPS-4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HPS4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HPS-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HPS-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HPS4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HPS-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HPS-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HPS4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HPS4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.