Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
HPK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402367
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HPK1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HPK1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HPK1 Antibody (G-9): sc-374183
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HPK1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402367 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MAP4K1 codifica la hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1), una chinasi Ser/Thr della famiglia Ste20 espressa prevalentemente nelle cellule immunitarie e collocata a monte della segnalazione MAPK. HPK1 agisce come regolatore negativo della segnalazione dei recettori per l’antigene modulando i complessi adattatori prossimali e plasmando l’attivazione a valle di JNK/p38, influenzando così gli output di segnalazione del recettore delle cellule T (TCR) e del recettore delle cellule B (BCR). Attraverso queste funzioni, HPK1 incide sulle soglie di attivazione dei linfociti, sulla produzione di citochine e sulla dinamica della sinapsi immunologica. Un’attività deregolata di MAP4K1/HPK1 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria ed è stata studiata in contesti di infiammazione immuno-mediata e di immunologia dei tumori come modulatore delle risposte immunitarie antitumorali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HPK1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAP4K1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAP4K1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAP4K1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HPK1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAP4K1 per lo studio della segnalazione di HPK1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MAP4K1 critici per la funzione di HPK1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAP4K1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HPK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HPK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAP4K1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HPK1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HPK1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAP4K1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAP4K1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.