HPA1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402215-LAC

L’HPSE umano codifica l’eparanasi (HPA1), un’endo-β-D-glucuronidasi che scinde le catene di eparan solfato sui proteoglicani della superficie cellulare e della matrice extracellulare, rimodellando la membrana basale e rilasciando fattori di crescita legati alla matrice. Modulando la segnalazione dipendente dall’eparan solfato, HPA1 influenza l’adesione e la migrazione cellulare, le risposte angiogeniche e il traffico delle cellule infiammatorie, con effetti a valle su vie quali la segnalazione FGF/VEGF e i gradienti di chemochine. Un’attività deregolata di HPSE è associata al turnover patologico della matrice extracellulare osservato nell’invasione e metastatizzazione tumorale, nell’infiammazione cronica e in disturbi vascolari e renali. Queste caratteristiche rendono HPSE un bersaglio ampiamente utilizzato per lo studio della biologia della matrice extracellulare, dell’extravasazione delle cellule immunitarie e delle interazioni tumore–stroma.

Le particelle di attivazione lentivirale HPA1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HPSE in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HPA1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HPSE, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HPA1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HPSE e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.