Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
HP1β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403235
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HP1β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HP1β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HP1β Antibody (4D7B8): sc-517288
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HP1β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403235 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CBX1 codifica la proteina 1 beta dell’eterocromatina (HP1β), un adattatore della cromatina conservato che riconosce H3K9me2/3 tramite il suo cromodominio e contribuisce alla compattazione della cromatina attraverso interazioni con le metiltransferasi istoniche SUV39H e altri repressori. HP1β contribuisce alla formazione dell’eterocromatina, al silenziamento trascrizionale, alla tempistica della replicazione del DNA e al mantenimento della stabilità del genoma coordinando l’architettura della cromatina di ordine superiore. Partecipa inoltre alle risposte al danno del DNA e alla scelta della via di riparo modulando l’accessibilità nei loci danneggiati e influenzando il reclutamento dei fattori di riparazione. La disregolazione dei programmi epigenetici legati a HP1β è stata associata a stati di differenziamento alterati e all’instabilità genomica osservati in diversi contesti di ricerca sul cancro e sul neurosviluppo.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HP1β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CBX1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CBX1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CBX1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HP1β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CBX1 per lo studio della segnalazione di HP1β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CBX1 critici per la funzione di HP1β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CBX1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HP1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HP1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CBX1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HP1β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HP1β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CBX1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CBX1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.