HoxC10 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-431637-LAC

Hoxc10 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxC10, un regolatore legante il DNA che definisce il pattern dei tessuti embrionali posteriori e contribuisce a specificare l’identità regionale lungo l’asse antero–posteriore. Nel topo, HoxC10 partecipa alle decisioni di destino cellulare e ai programmi morfogenetici integrando input dei segnali di sviluppo e coordinando reti trascrizionali che controllano differenziamento, migrazione e organizzazione tissutale. La sua attività è collegata a circuiti di regolazione genica dello sviluppo che includono altri fattori HOX e cofattori che governano lo stato della cromatina e la selezione degli enhancer. L’espressione deregolata dei geni HOX, inclusi programmi HOXC10 alterati, è spesso utilizzata come readout molecolare negli studi sulla differenziazione aberrante e sulla riprogrammazione trascrizionale oncogena.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxC10 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Hoxc10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxC10 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Hoxc10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HoxC10. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Hoxc10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.