HoxC10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431637

Panoramica

Hoxc10 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxC10, un regolatore che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e contribuisce a stabilire la patterning antero-posteriore e l’identità posizionale durante l’embriogenesi. Nello sviluppo del topo, i programmi HOX si integrano con reti di segnalazione guidate da morfogeni, come le vie WNT, FGF, acido retinoico e BMP, per coordinare la specificazione dei lignaggi, la formazione dello scheletro assiale e la differenziazione regionale. Oltre allo sviluppo, un’alterata regolazione dei geni HOX è comunemente associata a reti trascrizionali deregolate che influenzano il mantenimento del destino cellulare, la migrazione e la differenziazione. La perturbazione dei programmi associati a HOXC10 è quindi rilevante per lo studio dei difetti congeniti di patterning e dei meccanismi di riprogrammazione trascrizionale implicati nella biologia delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxC10 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hoxc10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hoxc10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hoxc10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HoxC10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hoxc10 per lo studio della segnalazione di HoxC10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hoxc10 critici per la funzione di HoxC10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hoxc10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HoxC10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HoxC10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hoxc10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HoxC10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HoxC10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hoxc10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hoxc10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.