HoxC10 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431637-ACT

Hoxc10 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxC10, una proteina HOX posteriore che controlla il patterning embrionale e l’identità posizionale regolando i programmi di espressione genica dello sviluppo. Nel topo, l’attività di HoxC10 contribuisce alla morfogenesi dell’asse e degli arti e influenza la differenziazione mesenchimale attraverso reti trascrizionali che intersecano le vie di segnalazione WNT, BMP e dell’acido retinoico. Un’espressione deregolata dei geni HOX è spesso associata ad alterazioni della specificazione di linea, proliferazione aberrante e fenotipi invasivi in contesti rilevanti per la malattia, rendendo Hoxc10 un nodo utile per studiare errori di patterning dello sviluppo e la riprogrammazione trascrizionale oncogena. HoxC10 rappresenta inoltre un modello maneggevole per indagare il controllo epigenetico dei cluster HOX e le transizioni dello stato della cromatina durante la differenziazione.

HoxC10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Hoxc10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxC10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Hoxc10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Hoxc10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxC10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Hoxc10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxC10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxC10 nelle cellule tumorali con espressione di Hoxc10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.