HoxB5 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-420914-LAC-2

Il gene murino Hoxb5 codifica il fattore di trascrizione con homeobox HOXB5, un regolatore che si lega al DNA in modo specifico per sequenza e contribuisce a stabilire la patterning antero-posteriore e l’identità dei segmenti durante l’embriogenesi. HOXB5 modula programmi di espressione genica che controllano la differenziazione mesodermica e neurale, coordinando vie di sviluppo coinvolte nella morfogenesi dei tessuti, nella formazione del sistema vascolare e del tratto respiratorio e nella specificazione delle linee ematopoietiche. Un’attività di HOXB5 deregolata e un’alterazione dell’equilibrio della rete HOX sono collegate ad anomalie dello sviluppo e sono state associate a stati trascrizionali oncogenici in modelli di neoplasie ematologiche, rendendo Hoxb5 un locus utile per studiare differenziazione, autorinnovamento e impegno di linea. L’editing genico di Hoxb5 nei sistemi murini supporta studi meccanicistici degli elementi cis-regolatori, dei circuiti trascrizionali e della fenotipizzazione dello sviluppo in vivo lungo l’organogenesi e in contesti di cellule staminali/progenitrici.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxB5 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Hoxb5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxB5 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Hoxb5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HoxB5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Hoxb5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.