Partículas Lentivirales de Activación (h) HoxB2: sc-404533-LAC

HOXB2 codifica el factor de transcripción homeobox HoxB2, una proteína de unión al ADN específica de secuencia que ayuda a establecer el patrón anteroposterior y la identidad segmentaria durante el desarrollo embrionario. HoxB2 regula programas de expresión génica que controlan la especificación del destino celular, la diferenciación y la morfogénesis tisular mediante redes transcripcionales que se entrecruzan con vías de señalización del desarrollo, como los programas sensibles al ácido retinoico. Se ha descrito una expresión aberrante de HOXB2 en múltiples contextos tumorales y trastornos del desarrollo, donde la alteración de la transcripción regulada por HOX puede influir en la proliferación, el compromiso de linaje y los fenotipos migratorios. En investigación biomédica, HOXB2 se estudia como impulsor de los circuitos reguladores génicos del desarrollo y como modulador dependiente del contexto de estados transcripcionales oncogénicos.

Las partículas de activación lentiviral HoxB2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HOXB2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HoxB2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HOXB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HoxB2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HOXB2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.