HoxB2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404533-LAC

HOXB2 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB2, una proteina che si lega al DNA in modo specifico per la sequenza e contribuisce a stabilire la polarità antero-posteriore e l’identità dei segmenti durante lo sviluppo embrionale. HoxB2 regola programmi di espressione genica che controllano la specificazione del destino cellulare, la differenziazione e la morfogenesi dei tessuti attraverso reti trascrizionali che interagiscono con vie di segnalazione dello sviluppo, come i programmi responsivi all’acido retinoico. Un’espressione aberrante di HOXB2 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e in disturbi dello sviluppo, in cui una trascrizione regolata dai geni HOX alterata può influenzare proliferazione, impegno di linea e fenotipi migratori. Nella ricerca biomedica, HOXB2 è studiato come motore dei circuiti regolatori genici dello sviluppo e come modulatore dipendente dal contesto di stati trascrizionali oncogenici.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxB2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HOXB2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HoxB2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HOXB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HoxB2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HOXB2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.