Plasmide Double Nickase (h) HoxA5: sc-402499-NIC

HOXA5 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA5, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui contribue à établir la polarité antéro-postérieure et coordonne, au cours du développement, des programmes de différenciation cellulaire. Dans les tissus adultes, HoxA5 influence des réseaux transcriptionnels qui contrôlent l’état épithélio-mésenchymateux, l’organisation de la matrice extracellulaire, ainsi que des réponses du cycle cellulaire et de l’apoptose dépendantes du contexte. Au sein des circuits de régulation des gènes HOX, il s’intègre à des voies liées à la chromatine et à la spécification de lignée pour façonner l’identité tissulaire et le remodelage. Une expression dérégulée de HOXA5 ou son silence épigénétique a été associée à des états de différenciation altérés et à une reprogrammation transcriptionnelle liée aux tumeurs dans plusieurs contextes tissulaires, ce qui appuie son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur des modèles de maladie.

HoxA5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HOXA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HOXA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HOXA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HOXA5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.