Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxA5: sc-402499-ACT

HOXA5 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA5, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui contribue à établir la régionalisation antéro-postérieure et l’identité des segments au cours du développement humain. Dans les tissus différenciés, HoxA5 participe à des programmes contrôlant l’engagement du destin cellulaire, la différenciation épithéliale et la morphogenèse tissulaire, en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec d’autres cofacteurs HOX. Une expression dérégulée de HOXA5 a été associée à des altérations de la prolifération, de l’invasion et à des changements d’état de lignée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la reprogrammation du développement et le contrôle transcriptionnel. En tant que régulateur de l’expression génique, HoxA5 est souvent étudié dans des voies liées à la différenciation, au remodelage de la matrice extracellulaire et au contrôle de la croissance dépendant du contexte.

HoxA5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXA5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXA5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXA5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXA5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA5 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXA5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.