HoxA5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402499-ACT

HOXA5 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA5, un regolatore del legame al DNA specifico per sequenza che contribuisce a stabilire la patterning antero‑posteriore e l’identità dei segmenti durante lo sviluppo umano. Nei tessuti differenziati, HoxA5 partecipa a programmi che controllano l’impegno del destino cellulare, la differenziazione epiteliale e la morfogenesi tissutale, coordinando reti trascrizionali con altri cofattori HOX. Un’espressione deregolata di HOXA5 è stata associata ad alterazioni della proliferazione, dell’invasività e a cambiamenti dello stato di linea in diversi contesti patologici, rendendolo un nodo utile per lo studio della riprogrammazione dello sviluppo e del controllo trascrizionale. In quanto regolatore dell’espressione genica, HoxA5 viene spesso analizzato in vie legate alla differenziazione, al rimodellamento della matrice extracellulare e al controllo della crescita dipendente dal contesto.

HoxA5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXA5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxA5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXA5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXA5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxA5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXA5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxA5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxA5 nelle cellule tumorali con espressione di HOXA5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.