HoxA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404634-NIC

HOXA3 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA3, un regolatore di legame al DNA specifico per sequenza che contribuisce a stabilire il patterning antero-posteriore e l’identità regionale durante lo sviluppo embrionale. HoxA3 coordina programmi di espressione genica che controllano la morfogenesi, la migrazione cellulare e la differenziazione, integrandosi con reti regolatorie HOX più ampie e con il controllo trascrizionale mediato dalla cromatina. Un’espressione deregolata di HOXA3 o un’alterata regolazione del cluster HOX sono state implicate in anomalie dello sviluppo e contribuiscono a stati trascrizionali oncogenici in molteplici contesti tumorali. Nei modelli cellulari umani, HOXA3 viene comunemente studiato per mappare circuiti che specificano la linea cellulare, indagare il controllo trascrizionale delle vie di sviluppo e caratterizzare gli esiti fenotipici delle perturbazioni della rete HOX.

HoxA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HOXA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HOXA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HOXA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HOXA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.