HoxA11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405264

Panoramica

HOXA11 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA11, un regolatore a legame al DNA specifico per sequenza che controlla programmi di patterning dello sviluppo e di differenziamento mesenchimale. Nelle cellule umane, HoxA11 contribuisce a reti trascrizionali che governano la morfogenesi degli arti e del tratto urogenitale ed è implicato nella decidualizzazione dello stroma endometriale tramite un crosstalk dipendente dal contesto con la segnalazione degli ormoni steroidei e il rimodellamento della cromatina. Un’espressione deregolata di HOXA11 o alterazioni del panorama regolatorio sono state associate a disturbi riproduttivi e anomalie dello sviluppo, e le perturbazioni dei cluster HOX sono caratteristiche ricorrenti in molteplici tipi di tumore, dove possono influenzare la proliferazione e l’identità di linea. In quanto regolatore trascrizionale nucleare, HoxA11 rappresenta un punto di accesso maneggevole per analizzare i circuiti di regolazione genica e le transizioni dello stato epigenetico in modelli rilevanti per lo sviluppo e la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HOXA11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HOXA11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HOXA11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HoxA11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HOXA11 per lo studio della segnalazione di HoxA11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HOXA11 critici per la funzione di HoxA11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HOXA11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HoxA11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HoxA11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HOXA11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HoxA11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HoxA11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HOXA11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HOXA11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.