HoxA10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401463-ACT

HOXA10 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA10, un regolatore di legame al DNA specifico per sequenza che modella lo sviluppo embrionale e mantiene l’identità dei tessuti nell’adulto. Nelle cellule umane, HoxA10 contribuisce alla regionalizzazione lungo l’asse antero-posteriore, all’organogenesi e alla specificazione di linea coordinando programmi trascrizionali che intersecano reti di segnalazione dello sviluppo, come le vie responsivi all’acido retinoico e l’espressione genica regolata dagli ormoni. La sua attività è particolarmente rilevante per la biologia uterina/endometriale e per la differenziazione ematopoietica, dove un’espressione alterata può modificare gli stati di proliferazione e differenziamento. La disregolazione dell’espressione di HOXA10 è stata associata ad anomalie dello sviluppo ed è stata studiata nel contesto di disturbi riproduttivi e del rimodellamento trascrizionale legato a neoplasie ematologiche.

HoxA10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXA10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxA10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXA10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXA10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxA10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXA10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxA10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxA10 nelle cellule tumorali con espressione di HOXA10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.