hnRNP U Plasmide Double Nickase (m): sc-424561-NIC

Il gene murino **Hnrnpu** codifica hnRNP U, una proteina nucleare ubiquitariamente espressa in grado di legare RNA e DNA, che funge da impalcatura per complessi ribonucleoproteici e contribuisce all’organizzazione della cromatina. hnRNP U partecipa alla maturazione del pre-mRNA, allo splicing alternativo e alla regolazione dell’espressione genica collegando i trascritti nascenti all’architettura nucleare e al macchinario trascrizionale. È stata implicata in vie che governano la stabilità del genoma, il metabolismo dell’RNA e programmi trascrizionali associati al ciclo cellulare attraverso interazioni con lunghi RNA non codificanti e fattori associati alla cromatina. La disregolazione dei processi di maturazione dell’RNA e dell’organizzazione nucleare legati a HNRNPU è associata a fenotipi di neurosviluppo e ad alterazioni dell’eccitabilità neuronale, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla biologia del sistema nervoso e sulla regolazione genica.

hnRNP U Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hnrnpu nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hnrnpu. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hnrnpu. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hnrnpu interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.