hnRNP R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404489

Panoramica

HNRNPR codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea umana R (hnRNP R), una proteina legante l’RNA che si associa ai trascritti nascenti e ai complessi ribonucleoproteici per regolare il processamento del pre‑mRNA, la stabilità dell’mRNA e la localizzazione subcellulare dell’RNA. hnRNP R contribuisce alla regolazione genica post-trascrizionale attraverso interazioni che influenzano lo splicing alternativo e il trasporto dell’RNA, collegando il metabolismo nucleare dell’RNA al controllo della traduzione nel citoplasma. La disregolazione delle proteine leganti l’RNA e delle reti associate allo splicing è implicata nei meccanismi delle malattie neurodegenerative e neuromuscolari, rendendo HNRNPR un nodo utile per lo studio dell’omeostasi dell’RNA. L’analisi sperimentale di hnRNP R supporta studi a livello di via sul rimodellamento del trascrittoma, sulla dinamica dei granuli di RNA responsivi allo stress e su fenotipi legati alla proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP R (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HNRNPR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HNRNPR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HNRNPR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hnRNP R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HNRNPR per lo studio della segnalazione di hnRNP R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HNRNPR critici per la funzione di hnRNP R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HNRNPR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hnRNP R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal hnRNP R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HNRNPR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hnRNP R Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR hnRNP R (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HNRNPR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HNRNPR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.