hnRNP K Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417266-LAC

HNRNPK codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea K (hnRNP K), una proteina multifunzionale in grado di legare DNA e RNA che coordina il controllo trascrizionale, lo splicing del pre‑mRNA, la stabilità dell’mRNA e la traduzione. hnRNP K agisce come hub di impalcatura, collegando vie dipendenti dai segnali con la cromatina e con complessi ribonucleoproteici, influenzando la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e programmi di espressione genica adattativi allo stress. Attraverso interazioni con fattori quali reti regolate da p53 e moduli di segnalazione mediati da chinasi, hnRNP K contribuisce a plasmare trascrittomi e proteomi specifici del contesto. La disregolazione dell’espressione di HNRNPK o dell’attività di hnRNP K è stata associata ad alterazioni dei fenotipi di differenziamento e proliferazione ed è frequentemente oggetto di studi molecolari in ambito oncologico e neuroevolutivo.

Le particelle di attivazione lentivirale hnRNP K (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HNRNPK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale hnRNP K (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di hnRNP K. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HNRNPK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.