hnRNP E2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402274

Panoramica

PCBP2 codifica la proteina umana legante l’RNA hnRNP E2, un fattore legante le sequenze poli(C) che si associa all’RNA a singolo filamento per regolare lo splicing dell’mRNA, la stabilità, l’esportazione nucleare e la traduzione. hnRNP E2 partecipa al controllo genico post-trascrizionale coordinando complessi ribonucleoproteici che determinano il destino dei trascritti e la produzione proteica, inclusa la modulazione del silenziamento traslazionale dipendente dalle UTR e di programmi di processamento dell’RNA. Attraverso queste attività, PCBP2 influenza le risposte allo stress cellulare, la proliferazione e i percorsi di differenziamento, ed è spesso studiato nel contesto di un metabolismo dell’RNA deregolato. Alterazioni della funzione o dell’espressione di PCBP2/hnRNP E2 sono state associate a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi segnali oncogenici e cambiamenti nelle interazioni ospite–virus mediati da reti regolatorie dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP E2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCBP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCBP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCBP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hnRNP E2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCBP2 per lo studio della segnalazione di hnRNP E2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCBP2 critici per la funzione di hnRNP E2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCBP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCBP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hnRNP E2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR hnRNP E2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCBP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCBP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.