HNF-6 Plasmide Double Nickase (h): sc-401082-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HNF-6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HNF-6 Double Nickase Plasmid (h) e il HNF-6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ONECUT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HNF-6 Antibody (G-10): sc-376167
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HNF-6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401082-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HNF-6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401082-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ONECUT1 codifica il fattore nucleare degli epatociti 6 (HNF-6), un fattore di trascrizione della famiglia CUT homeobox che coordina programmi genici di sviluppo e metabolici nei tessuti derivati dall’endoderma, inclusi fegato e pancreas. HNF-6 regola la differenziazione epiteliale, la morfogenesi duttale e la specificazione delle linee secretorie modulando reti trascrizionali che si intersecano con lo sviluppo epatobiliare, la differenziazione endocrina pancreatica e vie più ampie dell’omeostasi metabolica. Alterazioni dell’attività di ONECUT1/HNF-6 sono state associate a disfunzioni epatiche e pancreatiche, implicando questo regolatore in meccanismi rilevanti per la suscettibilità al diabete, fenotipi colestatici e disgenesia epatobiliare in sistemi sperimentali. In quanto regolatore trascrizionale sequenza-specifico, HNF-6 è spesso studiato per i suoi effetti sull’identità cellulare, sullo stato della cromatina e su programmi di espressione genica dipendenti dal contesto.
HNF-6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ONECUT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ONECUT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ONECUT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ONECUT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.