HMG-I/HMG-Y Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402396

Panoramica

HMGA1 codifica per le proteine architetturali della cromatina HMG-I e HMG-Y, fattori leganti il DNA tramite motivi AT-hook che rimodellano la cromatina per modulare trascrizione, replicazione e l’organizzazione genomica di ordine superiore. Legandosi a regioni regolatorie ricche in AT, HMGA1 facilita l’assemblaggio dell’enhanceosoma e influenza programmi trascrizionali legati alla segnalazione, inclusi il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e vie infiammatorie come l’espressione genica dipendente da NF-κB. Un’espressione o un’attività deregolata di HMGA1 è associata a plasticità cellulare alterata, proliferazione e adattamento metabolico, ed è frequentemente studiata nel contesto di reti trascrizionali oncogeniche e della progressione tumorale. HMGA1 influisce anche sull’accessibilità della cromatina in loci specifici di linea, rendendolo un nodo utile per indagare la regolazione epigenetica e l’espressione genica responsiva allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HMG-I/HMG-Y (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HMGA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HMGA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HMGA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HMG-I/HMG-Y.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HMGA1 per lo studio della segnalazione di HMG-I/HMG-Y, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HMGA1 critici per la funzione di HMG-I/HMG-Y
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HMGA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HMGA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HMG-I/HMG-Y Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HMG-I/HMG-Y (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HMGA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HMGA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.