Plasmide CRISPR/Cas9 KO HM74 (m): sc-429832
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HM74 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HM74, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HM74 Antibody (D-8): sc-377292
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HM74 (m) | sc-429832 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Hcar2 code HM74 (également connu sous le nom de GPR109A), un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) associé à Gi/o, qui répond à la niacine et à des métabolites endogènes tels que le β‑hydroxybutyrate afin de réguler la signalisation intracellulaire de l’AMPc. Dans les tissus immunitaires et de barrière de la souris, HM74 influence la chimiotaxie, la production de médiateurs inflammatoires et l’adaptation métabolique cellulaire via des voies dépendantes de l’AMPc et des programmes transcriptionnels en aval. L’activité du récepteur a été associée à la régulation des réponses des macrophages et des neutrophiles, à l’homéostasie épithéliale et à des réseaux de signalisation liés aux lipides. Une altération de la signalisation Hcar2/HM74 est donc pertinente dans des modèles d’inflammation, de stress métabolique et de lésions tissulaires, où le dialogue immunométabolique médié par les GPCR constitue une variable clé.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HM74 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hcar2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hcar2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hcar2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HM74.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hcar2 pour l'étude de la signalisation de HM74, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Hcar2 essentiels à la fonction de HM74
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hcar2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HM74 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HM74 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hcar2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HM74 plasmide HDR (m) et le HM74 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hcar2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hcar2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.