HM74 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429832

Panoramica

Hcar2 codifica HM74 (noto anche come GPR109A), un recettore accoppiato a proteine G di tipo Gi/o (GPCR) che risponde alla niacina e a metaboliti endogeni come il β-idrossibutirrato, regolando la segnalazione intracellulare dell’AMPc. Nei tessuti immunitari e di barriera del topo, HM74 influenza la chemiotassi, la produzione di mediatori dell’infiammazione e l’adattamento metabolico cellulare attraverso vie dipendenti dall’AMPc e programmi trascrizionali a valle. L’attività del recettore è stata associata alla regolazione delle risposte di macrofagi e neutrofili, dell’omeostasi epiteliale e di reti di segnalazione legate ai lipidi. Un’alterazione della segnalazione Hcar2/HM74 è quindi rilevante in modelli di infiammazione, stress metabolico e danno tissutale, in cui il crosstalk immunometabolico mediato da GPCR rappresenta una variabile chiave.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HM74 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hcar2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hcar2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hcar2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HM74.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hcar2 per lo studio della segnalazione di HM74, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hcar2 critici per la funzione di HM74
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hcar2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HM74 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HM74 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hcar2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HM74 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HM74 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hcar2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hcar2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.