HLX1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420868

Panoramica

Hlx codifica HLX1, un fattore di trascrizione homeobox che regola programmi di espressione genica responsabili della patterning embrionale e della specificazione di linea cellulare. Nei sistemi murini, HLX1 è implicato nella differenziazione ematopoietica e nello sviluppo delle cellule immunitarie, collegandolo a reti trascrizionali che coordinano proliferazione, migrazione e maturazione. Tramite il suo homeodominio di legame al DNA, HLX1 influenza vie regolatorie dello sviluppo e dell’immunità a valle, contribuendo a definire le decisioni sul destino cellulare in molteplici tessuti. Un’attività di Hlx deregolata è stata associata a stati di differenziazione alterati e a fenotipi rilevanti per difetti dello sviluppo e modelli di malattie immuno-correlate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HLX1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hlx in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hlx insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hlx a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HLX1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hlx per lo studio della segnalazione di HLX1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hlx critici per la funzione di HLX1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hlx per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HLX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HLX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hlx. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HLX1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HLX1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hlx per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hlx definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.