HLX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403700-ACT

O HLX humano (HLX1) codifica um fator de transcrição homeobox que regula decisões de destino celular durante o desenvolvimento embrionário e a especificação de linhagens hematopoéticas. O HLX1 modula programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação e padronização tecidual, com efeitos a jusante sobre redes de sinalização do desenvolvimento e a maturação de células imunes. A expressão desregulada de HLX tem sido relatada em contextos de neoplasias hematológicas e tumores sólidos, nos quais o controle transcricional alterado pode impactar a sinalização oncogênica, o estado de diferenciação e a invasividade celular. Essas propriedades fazem do HLX1 um nó útil para dissecar circuitos transcricionais que conectam desenvolvimento, biologia imunológica e programas de expressão gênica associados a doenças.

HLX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLX1 em células tumorais com expressão de HLX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.